離子交換色譜柱如何分離如何再生

 　　離子交換色譜柱是指離子交換色譜中的固定相中的一些帶電荷的基團(tuán)，這些帶電基團(tuán)通過靜電相互作用與帶相反電荷的離子結(jié)合。如果流動(dòng)相中存在其他帶相反電荷的離子，按照質(zhì)量作用定律，這些離子將與結(jié)合在固定相上的反離子進(jìn)行交換。

離子交換色譜柱基本原理：

　　離子交換色譜是蛋白純化技術(shù)中常用的一種純化方法，其原理是指被分離物質(zhì)所帶的電荷可與離子交換劑所帶的相反電荷結(jié)合，這種帶電分子與固定相之間的結(jié)合作用是可逆的，在改變pH或者用逐漸增加離子強(qiáng)度的緩沖液洗脫時(shí)，離子交換劑上結(jié)合的物質(zhì)可與洗脫液中的離子發(fā)生交換而被洗脫到溶液中。由于不同物質(zhì)的電荷不同，其與離子交換劑的結(jié)合能力也不同，所以被洗脫到溶液中的順序也不同，從而被分離出來。

離子交換色譜柱的再生方法有兩種：

　　（1）先用25ml蒸餾水通過柱子以除去緩沖鹽類，再用25ml甲醇沖洗，以除去由于分配效應(yīng)而殘存在骨架中的雜質(zhì)，再用25ml蒸餾水除去不溶于甲醇的殘存鹽類，后用緩沖液平衡。

　　（2）先用0.1mol/L的檸檬酸洗滌，然后用水洗滌（不要用堿性溶液，以防硅膠基質(zhì)溶解），后用緩沖液平衡。