操作Hamilton 陽離子交換柱純化蛋白常見問題

Hamilton 陽離子交換柱離子交換純化是利用離子交換劑上的可解離基團(活性基團)對各種離子的親和力不一樣人達到分離的目的的一種分離技術。離子交換劑是含有若干活性基團的不溶性物質，即在不溶性母體上引入若干可解離基團而成，根據引入解離基團的不同，可以分為陽離子交換劑和陰離子交換劑。各種離子對離子交換劑的親和力各不相同，親和力隨離子的價數與原子序數增加而增加，而隨離子水化膜半徑的增加而降低。對具體離子交換純化，需要主要離子交換劑的選擇和處理。洗脫不同蛋白的zui恰當的離子強度液不一定一樣，通常采用濃度梯度和PH梯度相結合的方式洗脫，純化不同的蛋白先摸一摸洗脫液的離子濃度和PH值，其具體的離子濃度范圍可以很大，0.01mol/l到1mol/l，甚至3.0mol/l，PH值的范圍液很廣。

Hamilton 陽離子交換柱因為蛋白是通過靜電引力可逆的結合在離子交換樹脂上，要使蛋白與離子交換樹脂之間離子鍵打開，zui常用的方法就是加大反荷離子的濃度。不同反荷離子與樹脂親和力是不同的，其強弱關系為： 陽性競爭離子：Ag+》CS+>K+>NH4+>Na+>H+>Li+ 陰性競爭離子：I->NO3->(PO4)3->CN->HSO3->Mg2+>HCO3->HCOO->CH3COO->OH->F- 如果某種離子溶液洗脫效果不好，可用另一種親和力強的離子代替。

離子交換柱屬于弱離子交換劑，只有在一定的pH值范圍內，才能有離子交換能力。